荧光原位杂交fish服务
产品名称： 荧光原位杂交fish服务
英文名称： 荧光原位杂交FISH服务
产品编号： BFISH01
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荧光原位杂交FISH服务 |
| 荧光原位杂交FISH的原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特性高和可以多重染色等特点，因此在分子细胞遗传学领域受到普遍关注。 荧光原位杂交FISH操作步骤 ⒈ 主要试剂 （1）变性液20×SSC 4ml，ddH2O 8ml甲酰胺28ml （2）PBD液1000ml 20×SSC中加入1.25gTween—20 ⒉ 操作流程 （1）硅化玻片，切片，烤片60℃过夜 （2）脱蜡入水，斜置切片，空干 （3） 2×SSC洗涤三次，每次5min（下简写为3×5） （4） 0.2M HCl处理，室温10接步骤3 （5） 0.25mg/ml 蛋白酶K处理，室温15～30接步骤3 （6）切片入??20℃梯度酒精脱水各2，空干 （7） 切片入85℃变性液8 （8）梯度酒精脱水各2，空干 （9）杂交液85℃变性5，0℃冰浴10；滴加至切片，加盖玻片，37℃过夜 （10） 反应体系中加入等体积的甲酰胺，45℃10 （11） 2×SSC洗涤，40℃，5min；2×SSC洗涤，37℃，5min （12）PBD洗涤切片，3×2 （13） 滴加异硫氢酸荧光素标记的亲和素（Avidin—FITC）,塑膜封片37℃30min （14）洗涤，同步骤12 （15） 滴加抗亲和素（Anti—Avidin）, 37℃30min （16) 重复步骤12，13，12 （17） 滴加DAP/I(二脒基二苯基吲哚/碘化丙啶)，直接封片，荧光镜检 |