双抗体ELISA夹心法(Sandwich ELISA)的原理是将特异性抗体（捕获抗体）结合到固相载体上形成固相抗体，然后加入待检样品，捕获抗体与待检样品的的抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体（检测抗体），与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色后，即可判断抗原含量，具有高灵敏度、高专一性，抗原无须事先纯化的优点。但捕获抗体与检测抗体必须精心选取，才可避免交叉反应或竞争相同的抗原结合部位。

单克隆抗体对定制服务流程（该流程为一般流程，如客户有特殊需求，可协商具体解决方案）：
 
阶段一：抗原制备
公司准备抗原，若客户提供抗原，需10-15mg高纯度蛋白质；
 
阶段二：单抗制备（1-140天）
0-60天： 持续免疫5只 Balb/c小鼠，间接ELISA测定血清效价，至效价足够高；
60-65天：融合小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞，获得需要的杂交瘤细胞。
65-90天：间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞并做亚克隆，提供10株阳性细胞上清给客户，供客户筛选，所有阳性克隆可保存2周左右。
90-120天：对客户选出的阳性杂交瘤细胞做第二次亚克隆，保证细胞株的纯度和稳定性，如有必要可增加亚克隆次数。对筛选出的阳性杂交瘤的单克隆抗体进行亚型鉴定，扩大培养客户确认的阳性克隆细胞。
120-140天：将扩大培养的阳性杂交瘤细胞制备腹水，并纯化抗体1-2mg。
 
阶段三：单抗配对（140-180天）
140-150天：对纯化抗体做生物素或过氧化物酶（HRP）标记，然后对标记抗体进行分子筛层析纯化。
150-180天： 用棋盘式夹心ELISA筛选单克隆抗体对。未标记的抗体做为捕获抗体，标记抗体做为检测抗体，分组配对，做ELISA检测。设置合适的阴性对照，加入标准抗原后OD值明显升高的抗体对，即为配对抗体对。
 
阶段四：产品交付（180-210天）
180-210天：制备以下产品并发货：5mg捕获抗体，1mg标记的检测抗体，2-5株杂交瘤细胞，抗体配对相关数据