使用前请将 DTT 溶液全部加入到植物总蛋白提取试剂中。

液氮研磨：

1、 取大约 100 mg 植物组织样品，转移到预冷的研钵中。加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。

2、 加入 1ml 植物总蛋白提取液混匀，然后将混合液全部转移到 1.5 mL 的离心管中。

3、 4℃ 12,000 rmp/min 离心 10 分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

4、 将上清液转移至一新的 1.5 mL 离心管中即得到蛋白溶液，可置于-80℃ 冰箱保存或立即使用。

匀浆：

1、 称取植物组织样品 100 mg，剪刀剪成碎片，转移到预冷的 15mL 离心管中。

2、 加入 1ml 植物总蛋白提取液，在冰上用 Polytron 式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的块状物。为了避免样品过热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。

3、 将匀浆液全部转移到 1.5 mL 的离心管中。

4、 4℃ 12,000 rmp/min 离心 10 分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

5、 将上清液转移至一新的 1.5 mL 离心管中即得到蛋白溶液，可置于-80℃ 冰箱保存或立即使用。

注意事项：

1、 如果急用或者暂时没有液氮或者匀浆机，也可以正常研磨：称取植物组织样品 100 mg，剪刀剪成碎片，转移到预冷的研钵或离心管中； 加入 1ml 植物总蛋白提取液，用研磨杵研磨，直到没有肉眼可见的块状物。后续和液氮研磨步骤一致。

2、 植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物，如果需要除去植物蛋白样品中残存的色素等杂质，可以在最后得到的上清液中加入 5 倍体积的冷丙酮或冷甲醇，混匀后-20℃放置 1 小时或过夜，然后 4℃ 12,000 rmp/min 离心 10 min，弃上清后室温风干，然后将样品溶于自备的后续实验缓冲液中即可。经过此纯化处理后，部分蛋白质可能会发生变性， 不能再用于活性检测。