1、组织源:1周龄大鼠乳鼠
2、性别:雌雄不限
3、消毒方法:PBS清洗5次
4、培养用液
基础培养基:DMEM(低糖)
添加因子:EGF;Dex;InsulinSelenium;Glutamine;Penicillin;Streptomycin;FBS
5、消化用液
成分:0.05%Collagenase-2(2%),0.1%Collagenase-1(2%)
时间:15min
温度:37℃
6、培养基本操作方法
(1)小鼠表面喷70%酒精消毒,无菌解剖,取出海马组织;
(2)无菌PBS清洗3次,用含双抗的无菌PBS清洗2次;
(3)加入3ml酶消化液,用吸管吹打散组织,37℃消化15min;
(4)充分吹打细胞消化液,使细胞尽量脱落;
(5)终止消化后,过200目筛网,1000rpm离心5min,弃上清液,加无菌PBS清洗并离心两次;
(6)弃上清,往沉淀中加5ml完全培养基,重悬细胞后接种至25方瓶,37℃、5%CO2培养箱中培养观察。
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