嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）指的是嵌合抗原受体T细胞通过识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-δ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体，使得患者的T细胞被“重编码”后，能够生成大量肿瘤特异性的CAR-T细胞。把重新编码后的嵌合抗原受体T细胞加进患者身体里，这种嵌合抗原受体就像GPS一样可以特异性地追踪和识别并引导T细胞杀伤肿瘤细胞。以CAR为基础的细胞免疫治疗是一种新的治疗恶性肿瘤的模式，越来越多的临床试验结果证实了CAR-T细胞免疫治疗的效力, 特别是血液病方面, 如白血病, 淋巴瘤。当然，在实体瘤的治疗方面仍需要不断努力。

2017年日本福冈大学医学院学者 Hirotomo Shibaguchi，Naixiang Luo，Naoto Shirasu 等发表 OncoTargets and Therapy 文章Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen，使用NEPA21进行电转实验。

文中研究表明，为了增强免疫细胞在肿瘤微环境下的抗肿瘤活性，研究者使用表达CAR的淋巴细胞结合IL-2融合蛋白，该融合蛋白含有针对癌胚抗原的单链片段抗体(scFv)。通过一系列对CAR进行改造，使其最有效地激活并表达INF-γ（肿瘤坏死因子）。实验结果显示，CAR导向的外周血单个核细胞（PBMCs）与含IL-2形成的融合蛋白的联合治疗应用，对MKN-45的抗肿瘤活性效果显著增强。

这种新型的CAR 与由功能性细胞因子和全人类单链抗体组成的融合蛋白的联合治疗将可能是一种很有前途的癌症免疫治疗方法。

本实验中研究者们使用了：

NEPA21 电转系统

文章对比了不同电转方式，推荐使用NEPA21 电转系统，转染效率高，细胞存活率好。

文中表明，“使用原代细胞核酸转染仪(Lonza Group Ltd, Basel, Switzerland)转染T细胞，转染效率达到40%，但遗憾的是，在其实验中，培养24小时后的细胞存活率为低于50％。由于我们使用原代细胞来评估单链抗体在CAR和融合蛋白中的联合抗癌作用，因此在基因转染后提高细胞存活率非常重要。”

“我们比较了2种电穿孔系统，即Nucleofector和NEPA21，其转染效率和细胞存活率：NEPA21在人T细胞中转染效率较高。因此，我们决定使用NEPA21转染hCR-2基因到PBMCs。（表S 1）”

“通过流式细胞仪检测EGFP的表达，在电穿孔后24小时，NEPA21转染后PBMCs中hCR-2的表达率约为60％，细胞存活率高达95%。”

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NEPA21高效基因转染系统

全新四步法电转程序更简单、更Free

NEPA21高效基因转染系统可实现悬浮细胞、贴壁细胞、受精卵、活体动物及离体组织器官的高效转染，包括鼠、兔、鱼、爪蟾\蝌蚪、蜜蜂、蟋蟀、蚕、水蚤、涡虫等各种活体及受精卵胚胎的转染，还可以用于植物种子、微藻等的电转化。配合电压衰减（Voltage Decay）设计，在获得高转染效率的同时，提高细胞存活率。

每个文章背后都有一个支持者~~~

1、

2、

3、Du SH, Li Z, Chen C, Tan WK, Chi Z, Kwang TW, Xu XH, Wang S
Co-Expansion of Cytokine-Induced Killer Cells and Vγ9Vδ2 T Cells for CAR T-Cell Therapy.

4、Shibaguchi H, Luo N, Shirasu N, Kuroki M, Kuroki M
Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen.